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本试剂盒对经典的异硫氰酸胍抽提RNA的方法进行了改良。采用溶菌酶与裂解液共同作用，迅速裂解细胞，释放出RNA的同时灭活RNase。RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列漂洗和离心等步骤进一步将蛋白等杂质去除，最后用DEPC-treated ddH2O将RNA从硅基质膜上洗脱。

操作简单，全过程可在40分钟之内完成。获得的RNA OD260/OD280一般为2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。

• 操作简单快速，整个过程40分钟左右完成。
  
• RNA纯度高，无基因组污染。
  
• 使用安全，操作过程中无需使用酚、氯仿等有毒试剂。
  
• 纯化柱吸附量大，稳定性好，重复性好。

• 自备试剂：无水乙醇、DEPC、溶菌酶等。
  
• 400μg/mL或3mg/mL溶菌酶溶液(DEPC-treated ddH2O配置，分装成小份，-20℃保存）。
  
• 按瓶身标签说明在GT Solution、NT Solution中加入相应量的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持GT Solution、NT Solution中的乙醇含量。（18mL GT Solution中应加入12mL无水乙醇，36mL GT Solution中应加入24mL无水乙醇；6mL NT Solution中应加入24mL无水乙醇，12mL NT Solution中应加入48mL无水乙醇。）
  
• 每次使用前请检查Buffer Rlysis-BG是否有沉淀，如有沉淀请于37℃溶解沉淀后使用。

• 取1mL对数生长期的细菌，8000rpm 4℃离心1min，彻底弃掉培养基，加100μL溶菌酶，振荡混匀。（G^-菌使用的溶菌酶浓度为400μg/mL，室温酶解3～5分钟；G⁺菌使用的溶菌酶浓度为3mg/mL，室温酶解5～10分钟。）
  
  • 收集菌体后可用500μL DEPC-treated ddH2O漂洗一次，10000rpm离心1分钟，弃上清，进一步去除残留的培养基。
• 加入350μL Buffer Rlysis-BG，立即震荡混匀，室温放置3min。
  
• 向裂解样品中加入1/2体积无水乙醇，充分混匀。
  
  • 即使出现沉淀也不要离心。
• 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液全部加至吸附柱中，静置1min，室温12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • 如需彻底清除RNA当中的DNA，可以搭配RNase-Free DNA清除试剂盒(货号：GS2266)。
• 将吸附柱放回收集管中，加入500μL GT Solution，静置1min，室温10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • GT Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
• 将吸附柱放回收集管中，加入500μL NT Solution，静置2min，室温10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • NT Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
• 将吸附柱放回收集管中，室温12000rpm离心2min。
  
  • 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
    
  • 将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的乙醇，乙醇的残留会影响RNA的产量和后续的实验。
• 将吸附柱放入RNase-free的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入30～50μL DEPC-treated ddH2O，静置2min，12000rpm离心2min，将所得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。
  
  • RNA在-70℃保存，以防降解，或保存在RNA保存液(货号：GS2322)中。